(A citometria di flussu, FCM) hè un analizzatore cellulare chì misura l'intensità di fluorescenza di i marcatori cellulari culurati. Hè una tecnulugia high-tech sviluppata basata annantu à l'analisi è a classificazione di e singole cellule. Pò misurà è classificà rapidamente a dimensione, a struttura interna, u DNA, l'RNA, e proteine, l'antigeni è altre proprietà fisiche o chimiche di e cellule, è pò esse basatu annantu à a cullezzione di ste classificazioni.
U citometru di flussu hè custituitu principalmente da e seguenti cinque parti:
1 Camera di flussu è sistema fluidicu
2 Fonte di luce laser è sistema di furmazione di u fasciu
3 Sistema otticu
4 Elettronica, sistema di almacenamentu, visualizazione è analisi
5 Sistema di classificazione di cellule
Trà elle, l'eccitazione laser in a fonte di luce laser è u sistema di furmazione di u fasciu hè a principale misurazione di i signali di fluorescenza in a citometria di flussu. L'intensità di a luce d'eccitazione è u tempu d'esposizione sò ligati à l'intensità di u signale di fluorescenza. U laser hè una fonte di luce coerente chì pò furnisce una illuminazione à lunghezza d'onda unica, alta intensità è alta stabilità. Hè a fonte di luce d'eccitazione ideale per risponde à questi requisiti.
Ci sò duie lenti cilindriche trà a fonte laser è a camera di flussu. Queste lenti focalizanu un fasciu laser cù una sezione trasversale circulare emessa da a fonte laser in un fasciu ellitticu cù una sezione trasversale più chjuca (22 μm × 66 μm). L'energia laser in questu fasciu ellitticu hè distribuita secondu una distribuzione nurmale, assicurendu una intensità d'illuminazione consistente per e cellule chì passanu per l'area di rilevazione laser. D’altronde, u sistema otticu hè custituitu da parechji insemi di lenti, fori di spillo è filtri, chì ponu esse divisi approssimativamente in dui gruppi: à monte è à valle di a camera di flussu.
U sistema otticu davanti à a camera di flussu hè custituitu da una lente è un foru stenopeicu. A funzione principale di a lente è di u foru stenopeicu (di solitu duie lenti è un foru stenopeicu) hè di fucalizà u fasciu laser cù una sezione trasversale circulare emessa da a fonte laser in un fasciu ellitticu cù una sezione trasversale più chjuca. Questu distribuisce l'energia laser secondu una distribuzione nurmale, assicurendu una intensità d'illuminazione consistente per e cellule in tutta l'area di rilevazione laser è minimizendu l'interferenza da a luce diffusa.
Ci sò trè tippi principali di filtri:
1: Filtru à passaghju longu (LPF) - permette solu à a luce cù lunghezze d'onda superiori à un valore specificu di passà.
2: Filtru passa-cortu (SPF) - permette solu a luce cù lunghezze d'onda inferiori à un valore specificu di passà.
3: Filtru passa-banda (BPF) - permette solu à a luce in una gamma di lunghezze d'onda specifica di passà.
Diverse cumminazzioni di filtri ponu dirige i signali di fluorescenza à diverse lunghezze d'onda à i tubi fotomoltiplicatori individuali (PMT). Per esempiu, i filtri per rilevà a fluorescenza verde (FITC) davanti à u PMT sò LPF550 è BPF525. I filtri utilizati per rilevà a fluorescenza aranciu-rossa (PE) davanti à u PMT sò LPF600 è BPF575. I filtri per rilevà a fluorescenza rossa (CY5) davanti à u PMT sò LPF650 è BPF675.
A citometria di flussu hè aduprata principalmente per a classificazione cellulare. Cù l'avanzamentu di a tecnulugia informatica, u sviluppu di l'immunologia è l'invenzione di a tecnulugia di l'anticorpi monoclonali, e so applicazioni in biologia, medicina, farmacia è altri campi sò sempre più diffuse. Queste applicazioni includenu l'analisi di a dinamica cellulare, l'apoptosi cellulare, a tipizzazione cellulare, a diagnosi di tumori, l'analisi di l'efficacia di i farmaci, ecc.
Data di publicazione: 21 di settembre di u 2023
