(Flow cytometry, FCM) hè un analizzatore di cellula chì misura l'intensità di fluorescenza di i marcatori di cellule macchiate. Hè una tecnulugia d'alta tecnulugia sviluppata basatu annantu à l'analisi è a classificazione di singole cellule. Puderà misurà rapidamente è classificà a dimensione, a struttura interna, l'ADN, l'RNA, i proteini, l'antigens è altre proprietà fisiche o chimiche di e cellule, è pò esse basatu nantu à a cullizzioni di sti classificazioni.
Citometru di flussu hè custituitu principalmente di e seguenti cinque parti:
1 Camera di flussu è sistema fluidicu
2 Fonte di luce laser è sistema di forma di fasciu
3 Sistema otticu
4 Sistema elettronicu, almacenamentu, visualizazione è analisi
5 Sistema di classificazione di e cellule
Frà elli, l'excitazione laser in a fonte di luce laser è u sistema di furmazione di fasciu hè a misura principale di i signali di fluorescenza in citometria di flussu. L'intensità di a luce di eccitazione è u tempu di esposizione sò ligati à l'intensità di u signale di fluorescenza. Laser hè una fonte di luce coherente chì pò furnisce illuminazione à una sola lunghezza d'onda, alta intensità è alta stabilità. Hè a fonte di luce di eccitazione ideale per risponde à queste esigenze.
Ci sò dui lenti cilindrichi trà a fonte laser è a camera di flussu. Queste lenti focalizzanu un fasciu laser cù una sezione trasversale circular emessa da a fonte laser in un fasciu ellitticu cù una sezione trasversale più chjuca (22 μm × 66 μm). L'energia laser in questu fasciu ellitticu hè distribuitu secondu una distribuzione normale, assicurendu una intensità di illuminazione coherente per e cellule chì passanu per l'area di rilevazione laser. Per d 'altra banda, u sistema otticu hè custituitu da parechje sette di lenti, pinholes è filtri, chì ponu esse divisu in dui gruppi: upstream è downstream di a camera di flussu.
U sistema otticu davanti à a camera di flussu hè custituitu da una lente è un pinhole. A funzione principale di a lente è u pinhole (di solitu duie lenti è un pinhole) hè di fucalizza u fasciu laser cù una sezione trasversale circular emessa da a fonte laser in un fasciu ellitticu cù una sezione trasversale più chjuca. Questu distribuisce l'energia laser secondu una distribuzione normale, assicurendu una intensità di illuminazione coherente per e cellule in tutta l'area di rilevazione laser è minimizendu l'interferenza da a luce vaga.
Ci sò trè tippi principali di filtri:
1 : Filtre à passage long (LPF) - permette solu di passà a luce cù lunghezze d'onda più altu ch'è un valore specificu.
2 : Filtre à passage court (SPF) - permette solu di passà a luce cù lunghezze d'onda sottu à un valore specificu.
3: Filtru passa-banda (BPF) - permette solu di passà a luce in una gamma di lunghezza d'onda specifica.
Diverse combinazioni di filtri ponu dirige i segnali di fluorescenza à diverse lunghezze d'onda à i tubi fotomultiplicatori individuali (PMT). Per esempiu, i filtri per a rilevazione di fluorescenza verde (FITC) davanti à PMT sò LPF550 è BPF525. I filtri utilizati per detectà fluoriscenza aranciu-russu (PE) davanti à u PMT sò LPF600 è BPF575. I filtri per a rilevazione di fluorescenza rossa (CY5) davanti à u PMT sò LPF650 è BPF675.
A citometria di flussu hè principalmente aduprata per a classificazione di e cellule. Cù l'avanzamentu di a tecnulugia di l'informatica, u sviluppu di l'immunologia è l'invenzione di a tecnulugia di l'anticorpi monoclonali, e so applicazioni in biologia, medicina, farmacia è altri campi sò diventate sempre più diffusa. Queste applicazioni includenu l'analisi di a dinamica cellulare, l'apoptosi cellulare, a tipografia cellulare, u diagnosticu di tumore, l'analisi di l'efficacità di a droga, etc.
Tempu di post: 21-Sep-2023
